药研生物技术服务
重组蛋白表达与纯化

维亚生物具有四个蛋白质基因工程表达系统,包括大肠杆菌表达系统、昆虫杆状病毒表达系统、哺乳动物悬浮表达系统、酵母表达系统,我们通过齐全的蛋白表达系统,为客户提供高效的蛋白质表达与纯化服务,以供蛋白结构与功能的研究。

服务内容
  1. 质粒构建

    维亚生物提供定制化的基因克隆服务,包括优化密码子、基因合成(外包)及后续克隆等。您只需提供基因模板,发送目标载体和克隆的需求或者提供蛋白序列、核酸序列,我们将根据您要求的具体规格,提供现有或量身定制的服务。此外,我们还可提供后续的蛋白高产表达、纯化及生产等一站式服务。

     

    · 亚克隆服务

    · 定点突变克隆服务

    · 缺失,插入突变克隆服务

    · 质粒抽提(Plasmid Endofree Miniprep、Midiprep、Maxiprep、Megaprep、Gigaprep)

    · 质粒内毒素去除和测定服务

  2. 蛋白高产表达

    大肠杆菌表达

    · 各种商业化载体与菌株、自有的同位素标记培养基;

    · 可将构建好的质粒转化到多种商业化菌株中(如BL21(DE3)、BL21(DE3)Gold、BL21(DE3)CodonPlus RIPL、Rosetta等);

    · 可进行不同温度的诱导表达(16℃-37℃);

    · 可选择不同的培养基(LB、TB、2xYT、M9等);

    · 可选择不同的诱导方式(IPTG诱导、阿拉伯糖诱导、自诱导等);

    · 可选择共表达chaperone提高可溶表达;

    · 基于96孔板的高通量表达测试(可测试不同菌株和不同构建的表达差异);

    · 同位素标记蛋白的表达(包括15N标记、15N13C双标记、15N2H双标记、15N13C2H三标记、15N2H双标基础上的13C-Me ILV选择性标记等)

     

    昆虫杆状病毒表达

    · 擅长于表达各种蛋白复合物;

    · 制备杆状病毒;

    · Bac-to-Bac系统、Bacmam系统、线性化共转染系统等制备杆状病毒;

    · 提供sf9、HF等细胞的表达优化服务;

    · 提供昆虫细胞悬浮培养大规模表达(1000L/月);

    · 每个月可操作性质粒数量:>200个;

    · 提供BIIC形式病毒的制备、保存及优化表达;

    · 昆虫细胞瞬转实验(InsectSelect BSD System)

     

    哺乳动物悬浮表达

    · 多种悬浮细胞系的瞬时转染表达和BacMam感染表达的服务:包括Expi293F、ExpiCHOS、Freestyle 293F、Expi293F™ GnTI-细胞等;

    · 哺乳动物细胞悬浮培养服务:包括瞬时转染、病毒感染以及稳转细胞系培养的大规模表达(400L/月);

    · 悬浮细胞的稳定表达细胞株的构建服务:用于蛋白大量生产

     

    酵母表达系统

    · 生产分泌蛋白、细胞内蛋白和膜结合蛋白;

    · >1,000L/year

  3. 蛋白纯化

    · 包涵体纯化

    蛋白不可溶表达,通过洗涤包涵体后变性溶解,然后纯化复性(或复性后纯化)得到可溶蛋白。

     

    · 分泌蛋白纯化

    利用信号肽引导外源蛋白表达分泌到细胞外,直接收集细胞上清(培养基)进行纯化。

     

    · 纯化中涉及到的常用修饰

    生物素化(体内或体外)、磷酸化、去磷酸化、去糖基化。

     

    · 纯化中涉及到的酶切

    TEV酶切、Ulp1酶切、PreScission(或3C)酶切、Thrombin酶切、Ek酶切等。

     

    · 纯化中涉及到的其他技术

    Crosslinking、Nanodisc、Fibrillization等。

  4. 蛋白生产

    · 可溶性蛋白的生产

    · 变复性蛋白的生产

    · 分泌蛋白的生产

    · 膜蛋白组装

技术与平台
常见问题解答
维亚生物提供哪些表达系统?我应该如何选择?

我们支持大肠杆菌、杆状病毒 / 昆虫细胞(Sf9 / Hi5 / Sf21 / S2)、哺乳动物细胞(HEK293 / CHO 瞬时及稳定表达)平台,以及针对特定靶标的毕赤酵母(Pichia pastoris)系统。系统选择通常取决于靶标类型:

 

  • 大肠杆菌(1–2 周)
  • 杆状病毒 / 昆虫细胞(3–4 周,含病毒扩增)
  • 哺乳动物细胞 HEK293 / CHO(2–3 周)
  • 毕赤酵母(5–6 周,含转化子筛选)

 

我们会综合考量靶标生物学特性、下游应用场景(晶体学、冷冻电镜、SPR 或体内研究)及项目时间线,为您提供系统选择建议。

 

蛋白类型 推荐表达系统
胞质蛋白(小分子量) 大肠杆菌
胞质蛋白(大分子量) 昆虫细胞 / 哺乳动物细胞
酶类 大肠杆菌 / 昆虫细胞
激酶 大肠杆菌 / 昆虫细胞
GPCR 昆虫细胞 / 哺乳动物细胞
抗体 哺乳动物细胞
分泌蛋白 哺乳动物细胞
膜蛋白 昆虫细胞 / 哺乳动物细胞
多蛋白复合物 昆虫细胞 / 哺乳动物细胞
如果我的靶标历来难以表达(如膜蛋白、GPCR、天然无序区域、多蛋白复合物),该如何处理?

维亚生物在挑战性蛋白靶标领域拥有丰富经验,包括不溶性蛋白、分泌蛋白、膜蛋白及蛋白复合物等。为最大化项目成功率,我们充分利用多个表达平台——包括大肠杆菌、杆状病毒 / 昆虫细胞、哺乳动物细胞及酵母——并根据每种蛋白的特性量身定制纯化策略。

 

常用策略包括:融合标签筛选、截短 / 结构域边界优化、序列插入、纳米抗体或抗体片段共复合以提升稳定性(如用于冷冻电镜);针对膜蛋白的脂质纳米盘 / 去垢剂筛选。并且,在进入大规模生产前开展迭代式小规模表达试验。

维亚的专利膜蛋白表达技术如何支持药物发现?

维亚生物膜蛋白表达专利技术能够实现 GPCR、离子通道等挑战性靶标的成功制备。我们的平台整合了优化的表达宿主、稳定化融合伴侣与突变策略、去垢剂 / 纳米盘重组体系,以及构象锁定策略(如纳米抗体共复合),可产出均一、具有功能活性的蛋白样品,直接支持高质量结构解析、SPR 及其他生物物理分析。我们拥有涵盖 120+ 种 GPCR、80+ 种转运蛋白及 50+ 种离子通道的膜蛋白文库。

客户自备表达纯化好的蛋白能否直接用于维亚生物的晶体学或冷冻电镜研究?

可以的。维亚生物提供从临床前候选化合物全流程一体化平台,涵盖蛋白表达与纯化、结构解析(X 射线晶体学与冷冻电镜)、苗头化合物发现、先导化合物优化、生物测定及药理学,所有服务均可在维亚生物内部无缝衔接、统一交付。我们的核心优势在于蛋白表达与结构生物学高度整合,构成无缝一体化工作流程。蛋白表达团队在项目初期便针对下游结构应用进行优化,涵盖 X 射线晶体学、冷冻电镜及 SPR、ASMS 等生物物理分析,从而消除交接延迟,确保全程样品质量,显著缩短项目周期,降低风险。

除纯度检测外,能否评估蛋白的活性 / 功能?

可以的。我们建议在项目启动时即确定功能性 QC 标准,以确保在开展结构解析或化合物筛选之前,明确界定项目成功的评判依据。

 

根据靶标特点,维亚可提供以下服务:酶活力测定、配体结合分析(SPR、ITC、荧光偏振),以及核苷酸负载状态验证(如 GTP酶  的 GDP / GTPγS 状态)。

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